中药分析与检测
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三七

NOTOGINSENG RADIX ET RHIZOMA

本品为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎。主产云南、广西,以广西靖西、田阳、百色及云南文山所产的三七质量较好,为道地药材。秋季花开前采挖,洗净,分开主根、支根及根茎,干燥。支根习称“筋条”,根茎习称“剪口”。其味甘、微苦,性温。具有散瘀止血、消肿止痛的功能[1]

【主要成分】 含多种皂苷,总量为9.75%~14.9%,和人参所含皂苷类似,但主要为达玛脂烷系皂苷,有人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1及三七皂苷(notoginsenoside) R1、三七皂苷R2、三七皂苷R3、三七皂苷R6。含止血活性成分田七氨酸(dencichine)、三七黄酮B及槲皮素等少量黄酮类成分。挥发油中鉴定出几十种化合物。水提取液尚含一种具止血活性的三七素(N-oxalo-L-αβ-diaminopropionic acid)。尚含无机微量元素和16种氨基酸等。

【定性分析】 取本品粉末0.5g,加水约5滴,搅匀,再加以水饱和的正丁醇5mL,密塞,振摇约10min,放置2h,离心,取上清液,加3倍量以正丁醇饱和的水,摇匀,放置使分层(必要时离心),取正丁醇层,置蒸发皿中,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各1μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10) 10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸溶液(1→10),于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫色外光灯(365nm)下检视,显相同的荧光斑点。

【含量测定】 人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,三七皂苷R1[1](高效液相色谱法)

(1)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈为流动相A,以水为流动相B;按下表进行梯度洗脱;检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。

(2)对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成每1mL中各含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液,即得。

(3)供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.6g,精密称定,精密加入甲醇50mL,称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

(4)测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品按干燥品计算,含人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Rb1(C54H92O23)及三七皂苷R1(C47H80O18)三者的总量不得少于5.0%。

【现代研究】

徐文等[2]利用UPLC-ESI-HRMS定性分析方法研究三七的化学成分。方法:Kinetics色谱柱,梯度洗脱,DAD检测,ESI-LTQ-Orbitrap质谱负离子模式,三七成分在离子阱内进行一级全扫描离子CID多级质谱,鉴定43个成分,并首次从三七中检测到新型的乙酰取代皂苷成分和三七皂苷母核。

李丽明等[3]采用顶空固相微萃取-气质联用技术检测三七挥发性成分的组成。结果表明不同规格三七中化合物种类、含量和数量不同,不同规格三七中异萜烯类化合物占较大比重,其中α-愈创木烯含量较高。

杨晶晶等[4]采用高效液相色谱法测定三七地上部分中γ-氨基丁酸的含量。方法:C18柱色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-醋酸钠缓冲液4.1g/L,检测波长为254nm。结果表明,不同产地三七花中GABA平均含量高于茎叶,分别为0.53%,0.49%。

李建蕊等[5]采用溴化钾压片法及红外光谱技术对三七的剪口、主根、筋条等不同部位以及表皮、韧皮部和木质部等不同组织的红外光谱及其二阶导数谱进行比较分析。结果表明三七各部位及组织的整体峰形相似,但不同部位和组织的红外光谱及其特征性化学成分有差异。

刘岩等[6]用80%乙醇提取还原性糖,然后用水提取三七多糖,利用分光光度法、蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量,检测波长为528nm。研究表明三七不同部位中多糖含量有明显差异,筋条中多糖含量最高,茎叶中多糖含量最低。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:11.

[2]徐文,丘小惠,张靖等.超高压液相/电喷雾-LTQ-Orbitrap质谱联用技术分析三七根中皂苷类成分[J].药学学报,2012,47(6):773-778.

[3]李丽明,任斌,郭洁文等.不同规格三七挥发性成分研究[J].中药材,2013,36,(6):934-938.

[4]杨晶晶,刘英,崔秀明等.高效液相色谱法测定三七地上部分γ-氨基丁酸的含量[J].中国中药杂志,2014,39(4):606-609.

[5]李建蕊,陈建波,周群等.中药三七不同部位和组织的红外光谱分析[J].光谱学与光谱分析,2014,34(3):634-637.

[6]刘岩,范开,李龙军等.三七多糖的含量测定方法及不同部位多糖的含量变化研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(19):118-120.

(方艳夕)