附：川牛膝

CYATHULAE RADIX

本品为苋科植物川牛膝Cyathula officinalis Kuan的干燥根。秋、冬二季采挖，除去芦头、须根及泥沙，烘或晒至半干，堆放回润，再烘干或晒干。本品性平，味甘、微苦。具有逐瘀通经，通利关节，利尿通淋的功能[1]。

【主要成分】　主要含有甾类化合物，如杯苋甾酮、异杯苋甾酮，羟基杯苋甾酮、苋菜甾酮、前杯苋甾酮、羟基促蜕皮甾酮等活性成分。

【定性分析】　取本品粉末2g，加甲醇50mL，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至约1mL，加于中性氧化铝柱（100～200目，2g，内径为1cm）上，用甲醇-乙酸乙酯（1:1）40mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取川牛膝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取杯苋甾酮对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5～10μL、对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【含量测定】　杯苋甾酮[8]（高效液相色谱法）

（1）色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为243nm；理论板数按杯苋甾酮峰计算应不低于3000。

（2）对照品溶液的制备　取杯苋甾酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含25μg的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备　取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入加甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法　分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含杯苋甾酮（C29H44O8）不得少于0.030％。

【现代研究】

张祎楠等[9]采用ISSR分子标记技术，对川牛膝主产地6个居群，23份川牛膝样本进行植物性状研究及遗传性研究，初步评价四川省川牛膝居群的遗传多样性。结果发现四川主产地川牛膝居群间遗传多样性较小，物种间遗传多样性较大。

谭玉柱等[10]应用HPLC测定10批药材的色谱图，确立标准指纹图谱。方法：采用Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1％磷酸水梯度洗脱，流速0.8mL/min，柱温30℃，检测波长210nm。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：72，38.

［2］穆海风，李会军，陈君等.HPLC法同时测定怀牛膝中3种甾酮类成分［J］.中国药科大学学报，2014，45（2）：210-212.

［3］赵变，常珍珍，史彪等.HPLC法同时测定怀牛膝中5-羟甲基糠醛和蜕皮甾酮的含量［J］.药物分析杂志，2011.31（8）：1582-1585.

［4］张留记，孙丹丹，屠万倩等.不同产地怀牛膝β-蜕皮甾酮含量测定及指纹图谱研究［J］.天然产物研究与开发. 2013，25：500-505，510.

［5］杨蝉，杨玉琴，朱京祎等.不同产地牛膝多糖的含量测定［J］.微量元素与健康研究.2013，30（6）：21-22.

［6］成丹.贵州不同产地牛膝中微量元素的含量测定［J］.微量元素与健康研究，2014，31（1）：26-27.

［7］孙晋鹏，张军，秦雪梅等.柱前衍生化HPLC-UV测定牛膝中齐墩果酸的含量［J］.中国现代应用药学，2010，27（1）：49-53.

［8］赵素霞，吴国学，张振凌等.不同种类酒炙对牛膝饮片甜菜碱含量的影响［J］.中药材，2011，34（5）：690-692.

［9］张祎楠，裴瑾，马云桐等.四川产栽培川牛膝遗传多样性的ISSR分析［J］.中成药，2013，35（8）：1724-1729.

［10］谭玉柱，童婷婷，潘晓丽等.川牛膝的HPLC指纹图谱研究［J］.成都中医药大学学报，2011，34（3）：75-77.

（李娟/窦金凤）