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1.4 发射光谱分析的特点
与吸收相比,发射灵敏度更高。假定,在吸光测量方式中,吸光度值A的测量极限为0.10 或0.010,典型的有机化合物摩尔吸光系数为105 L/(mol·cm),那么根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律,climit=cLOD=Alimit/(εb)=(0.10~0.010)/105 mol/L=10−6~10−7 mol/L。这是紫外-可见吸光光度分析的检测极限。
通常,荧光分析的检测限比吸光光度分析至少低两个数量级,或者说,灵敏度高出两个数量级以上。这是因为吸光光度分析是建立在光源背景下的,吸光度相关项为lg[I0/(I0−Ia)],对于极稀的溶液,Ia很小,对数值接近于零,因此吸光光度分析灵敏度不高。而荧光分析是直接测量暗背景下的发光,原则上只要检测器足够灵敏,就可以检测足够少的分子的发光,甚至单分子发光。而且,增大入射光的强度,可以增大荧光的强度。目前时髦的单分子检测,除了增强的激光共振拉曼单分子检测技术等外,主要是通过荧光单分子检测手段实现的。
此外,发光分析的选择性更好。因为,尽管可以吸收紫外-可见光的物质很多,但并非所有的吸收生色团都能成为发光色团,产生荧光发射。发光分析的可选择因素更多,如激发或发射波长可供选择。
在应用领域方面,其实两种光学方法都是差不多的,涉及科学研究、生物分析、免疫分析、生命过程、基因工程、蛋白组学计划、公安和反恐、检验检疫等领域。