电化学发光免疫测定（electro chemiluminescence immune assay，ECLIA）。ECLIA是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。电化学发光法源于电化学法和化学发光法，而ECLI是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光两个过程。

ECL反应底物有两种：

三氯联吡啶钌［Ru（bpy）3］2 + 络合物：

钌（ruthenium，Ru），原子序数44，原子量101.07。元素名来自拉丁文，1827年俄国化学家奥赞在铂矿中发现钌；1844年俄国化学家克劳斯肯定它是一种新元素。钌在地壳中的含量约为十亿分之一，是铂系元素中含量最少的一个。钌常与其他铂系元素一起分散于冲积矿床和砂积矿床中。钌有7种天然稳定同位素：钌96、98、99、100、101、102、104。钌为银白色金属，熔点2310℃，沸点3900℃，密度12.37×10 ³/m ³。钌的化学性质不活泼，在空气和潮湿环境中稳定；不溶于酸和王水，溶于熔融的强碱、碳酸盐、氰化物等；加热到900℃时能与氧反应；加热时能与氟、氯、溴反应；钌有形成配位化合物的强烈倾向，还有良好的催化性能。

第一抗体标记生物素（与微磁珠结合）；第二抗体标记Ruthenium（产生光信号）；两种抗体皆能与靶抗原特异性结合。形成的免疫复合物转移至测量池，启动磁场，吸附待测免疫复合物；加入Procell溶液，去除反应体系杂质并提供TPA。

在工作电极上（阳极）加一定的电压能量作用下，二价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ²⁺ 释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶钌［Ru（bpy）3］ ^{3 +}，同时，电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基TPA ⁺，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基TPA·，这样，在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ^{3 +} 和具有强还原性的三丙胺自由基TPA。

具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ^{3 +} 和具有强还原性的三丙胺自由基TPA·发生氧化还原反应，结果使三价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ³⁺ 还原成激发态的二价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ^{2 +} ，其能量来源于三价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ^{3 +} 与三丙胺自由基TPA·之间的电势差，激发态 ［Ru（bpy）3］ ^{2 +} 以荧光机制衰变并以释放出一个波长为620nm光子的方式释放量，而成为基态的 ［Ru（bpy）3］ ^{2 +} 。

循环过程：上述化学发光过程后，反应体系中仍存在二价的三氯联吡啶钌 ［Ru（bpy）3］ ²⁺和三丙胺（TPA），使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行，这样，整个反应过程可以循环进行。通过上述的循环过程，测定信号不断的放大，从而使检测灵敏度大大提高，所以ECL测定具有高灵敏、高特异性、高精密度的特点。

现以Elecsys电化学发光系统为例加以说明。

1.校准品　指用生物液或缓冲液配制的一组不同定值浓度浓度的待测物质溶液，用于制作或校准原厂提供计量-反应曲线或用作cut off值校准。

2.标记抗原或抗体　［Ru（bpy）3］ ²⁺经N羟基琥珀酰胺酯（NHS）化学修饰后可与抗体、蛋白质抗原、半抗原、激素、核酸等各种分子结合形成稳定的标记物。而且［Ru（bpy）3］ ²⁺NHS分子量较小，不易影响被标记物的免疫活性和可溶性。

3.生物素化抗体或抗原链霉亲和素（streptoavidin，SA）和生物素（biotin，B）　是具有很强的非共价特异性结合能力的一对化合物，一分子SA可结合四分子B，Elecsys的试剂中，抗体或抗原与活化的B结合，进而可通过B与固相微粒表面的SA结合达到分离免疫复合物的目的。

4.固相载体是带有磁性的直径约2.8μm的聚苯乙烯微粒，将SA通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在固相微粒上，形成通用的能与B结合的固相载体。

5.TPA溶液。

6.洗涤液。

1.在反应管中加入待测样品、［Ru（bpy）3］ ^{2 +} 标记抗体、生物素化抗体，37℃反应9分钟。

2.加入SA磁性微粒，37℃反应9分钟，反应液输入流动池，磁性微粒在磁铁吸引下迅速沉积，附着在流动池底部的电极表面，其余反应液流出流动池，完成免疫复合物和游离成分的分离。

3.将TPA溶液送入流动池，将残存的游离成分排出流动池，使流动池中充满TPA溶液。

4.撤下磁铁，电极通电，［Ru（bpy）3］ ^{2 +} 与TPA发生电化学发光反应，发出的光被光电倍增管收集。

5.经换算得到待测物浓度。

6.向流动池中送入清洗液，彻底冲洗除去反应物，即可测定下一个标本。