3.1 材料与方法

3.1.1 试验材料

牡竹属（Dendrocalamus）、巨竹属（Gigantochloa）与锐药竹属（Oxytenanthera）19种竹种的试验材料来源见表3-1。

表3-1 竹种与采集地

3.1.2 DNA提取

DNA提取采用改进的CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）裂解-硅珠吸附法[6]。在10mL离心管中加入4mL CTAB提取液及120μL巯基乙醇，在恒温振荡器中预热至65℃。取硅胶干燥后的叶片样品1g，剪碎，加少许石英砂和PVP（聚乙烯吡咯烷酮）在液氮中研磨成粉末，迅速转入预热的CTAB提取液，充分摇匀后水浴60min。将样品置于冰上迅速冷却至室温，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混合物，充分混匀后12000r/min离心10min，取上清，加入1/10体积的硅珠悬浮液，振荡混匀，静置15min, 6000r/min离心20s。弃上清，用600μL漂洗液充分溶解沉淀，振荡混匀，6000r/min离心20min。重复漂洗1次，弃上清，用70%的乙醇漂洗沉淀2遍，最后用无水乙醇漂洗1遍。自然风干，加50μL TE（三羟甲基氨基甲烷+乙二胺四乙酸）缓冲液溶解。56℃水浴保温10min,12000r/min离心10min，上清即为DNA溶液，于-20℃保存。将提取的DNA样品、λDNA与溴酚蓝上样缓冲液混匀，在浓度为1.2%的琼脂糖凝胶上电泳1h，与标准λDNA比色，确定DNA的浓度和纯度，确定最终DNA模板浓度为10ng/μL。