第二节　荧光染色显微镜检查

一、检验目的

同萋－尼氏染色法。

二、方法原理

抗酸杆菌经金胺“O”染液染色后，在含有紫外光源的荧光显微镜下发出橘黄颜色，高倍镜（物镜“40×”，目镜“10×”）下，可见抗酸杆菌产生黄绿色荧光，呈杆状或分枝状。

三、检测样品

同萋－尼氏染色。

四、仪器设备

荧光显微镜，其他设备同萋－尼氏染色镜检设备。

五、试剂耗材

金胺“O”　　　1g

石炭酸　　　　　50ml

乙醇　　　　　100ml

补蒸馏水至　　1000ml

3%盐酸乙醇（配制方法参照萋－尼氏染色）。

0.5%高锰酸钾水溶液。

同萋－尼氏染色。

六、操作步骤

同萋－尼氏染色。

加复染剂复染1分钟，沥去复染液，流水自玻片一端轻洗，自然干燥后镜检。

有涂膜面向上放置玻片于荧光或LED显微镜载物台，并以卡尺固定后，首先以“10×”目镜、“20×”物镜进行镜检，发现疑为抗酸杆菌的荧光杆状物质，使用“40×”物镜确认。在暗背景下，抗酸菌发出黄色荧光，呈杆状略弯曲。

七、结果判读

荧光染色镜检结果分级报告标准：

1.荧光染色抗酸杆菌阴性（－）：0条／50视野。

2.荧光染色抗酸杆菌阳性（报告抗酸菌数）：1～9条／50视野。

3.荧光染色抗酸杆菌阳性（1＋）：10～49条／50视野。

4.荧光染色抗酸杆菌阳性（2＋）：1～9条抗酸菌／1视野。

5.荧光染色抗酸杆菌阳性（3＋）：10～99条抗酸菌／1视野。

6.荧光染色抗酸杆菌阳性（4＋）：100条及以上抗酸菌／1视野。

报告“2＋”至少观察50个视野，“3＋”及以上的阳性结果至少观察20个视野。

八、注意事项

荧光染色后尽快检查（24小时内），防止荧光淬灭而影响阳性检出。

荧光显微镜高压贡灯寿命有限，使用时避免反复开关，关闭后需要再使用时必须待灯泡冷却后再开启；高压贡灯发光强度减弱时应及时更换。

若荧光染色菌体形态不典型，则需要用萋－尼氏抗酸染色法确认。

参见萋－尼氏染色。

九、质量控制

同萋－尼氏抗酸染色。

荧光染色的玻片保存，应将玻片盒中放置干燥剂后密封放置在4℃冰箱避光保存。

荧光染色的涂片进行盲法复检复核时，发现染色效果不佳时应重新染色后阅片。

十、临床意义

同萋－尼氏染色。

1.结果使用高倍镜观察，其工作效率大大提高。

2.绿色荧光较醒目，有利于检查目标发现和提高阳性率。

1.染色时间较萋－尼氏抗酸染色法长。

2.染色后24小时内检查，否则菌体阳性荧光可淬灭。