第二节　病原生物感染的诊断

学习目标

病原生物感染的诊断包括询问病史、实验室诊断（包括病原学和免疫学），必要时辅助以其他技术进行诊断。

一、流行病学史

详细询问病史对于许多病原生物感染的诊断和治疗有重要指导意义，尤其是在病原学诊断尚未得到结果前。如来自疟疾疫区的务工人员出现疟疾发作的症状提示疟疾的可能，进食海产品后出现食物中毒的症状提示副溶血性弧菌感染的可能等。

二、病原生物感染的实验室诊断

（一）病原学诊断

1.标本采集

对临床怀疑感染者，临床工作人员需要根据患者的病史和临床感染特征，采集相应的标本，开展检验。常见的临床标本包括血液、粪便、尿液、痰、脓汁、脑脊液、胸腹水、关节腔穿刺液等。标本采集要适量，能够满足实验室诊断的需求。部分依赖血清抗体阳性进行诊断的标本，需要采集急性期和恢复期的双份血清。

标本采集后要尽快送实验室开展检验工作，不能够及时送检的，要保存在合适的保存液和适宜的温度下。不同病原体感染的样本采集和运送时需要注意的问题存在异同，详见相应的章节。标本的采集、运送和检验过程中，要严格遵循病原微生物实验室以及标本保藏和运送过程中的生物安全要求。

2.快速诊断

常见的快速诊断包括形态学观察、抗原成分和核酸成分检查。形态学观察包括用肉眼、放大镜和显微镜观察。肉眼和放大镜适合于寄生虫等较大病原生物检查诊断，如蝇、蛆、蚊等节肢动物；光学显微镜的观察对于部分形态典型的病原生物感染有快速诊断价值，如皮肤伤口渗出液涂片革兰氏染色后观察到竹节状排列的革兰氏阳性粗大杆菌，有助于皮肤炭疽病的快速诊断；红细胞内观察到疟原虫的不同阶段有助于疟疾的诊断。电子显微镜可用于观察病毒的形态。免疫学方法检测病原生物的抗原成分；分子生物学方法检测病原生物的核酸。

3.分离培养和鉴定

分离培养是指从混杂的多种病原中获得单一病原并加以培养繁殖，以利于准确诊断。对于可以在体外人工培养的病原微生物，可以选用适宜的培养条件进行分离培养和鉴定。如许多病原性细菌和真菌感染的标本，接种适宜的培养基分离培养，得到纯种的样本后进行生化鉴定、血清学分型。对于病毒标本，需要选用活细胞进行培养，常用的技术包括动物接种、鸡胚培养和细胞培养，培养后收集培养物进行鉴定。寄生虫感染的诊断分离培养应用较少，必要时也可应用，如粪便标本进行毛蚴、钩蚴孵化，用于诊断血吸虫、钩虫感染。

病原生物的鉴定中有时可采用动物实验。

4.药敏试验

对于分离培养获得的病原生物，可以选用相应的抗病原生物药物开展体外敏感试验，根据药敏试验的结果，指导临床选择用药。

5.分子生物学技术

分子生物学的发展为病原生物感染的诊断提供了新的技术，常用的技术包括聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）、核酸杂交技术[包括Southern印迹杂交（Southern blot）、Northern印迹杂交（Northern blot）、斑点杂交（dot blot）和原位杂交（in situ hybridization，ISH）]、基因芯片、DNA测序等。

（二）免疫学诊断

大多数病原生物（朊粒除外）是良好的抗原，感染后可以把部分抗原成分释放至宿主体内，可以刺激机体产生相应的抗体或致敏淋巴细胞，因此选用适当的免疫学技术，通过检测标本中的抗原或抗体可进行诊断。

常用于免疫学诊断的方法包括：酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、酶联免疫斑点试验（enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT）、凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、放射免疫试验（radiation immunity assay，RIA）、协同凝集试验、间接血凝试验（indirect haemagglutination assay，IHA）、间接荧光抗体试验（indirect fluorescent antibody assay，IFA）、对流免疫电泳（counter immunoelectrophoresis，CIEP）、免疫印迹技术（enzyme-linked immunoblotting technique，ELIB）等。

三、其他技术在病原生物感染中的应用

影像学技术在病原生物感染诊断中的应用广泛。包括B超、X线成像技术，磁共振成像技术等。根据影像学资料，结合病原学检测的结果，可以快速准确的做出病原生物感染的诊断。如根据肺部X线片或CT影像学资料，结合痰标本抗酸染色结果，快速诊断开放性肺结核；肝脏B超和CT资料显示的囊性占位性病变结合血清的抗体检测阳性结果，做出肝包虫的诊断。

（刘　新　韩　俭）

学习小结

复习参考题