2.2　实验材料

2.2.1　水样采集

油水样均采自大港油田官69区块产油井，用灭菌塑料桶采样密封，在无菌条件下用普通滤纸过滤除去悬浮物质，于4℃低温保存，48h内处理。

2.2.2　培养基

基础培养基（g·L^-1）：KH₂PO₄ 0.3，Na₂HPO₄·12H₂O 1.25，MgSO₄·7H₂O 0.01，NH₄Cl 0.2，CaCl₂·2H₂O 0.01，FeSO₄·7H₂O 0.36，酵母粉0.5，蔗糖1.0，pH 7.2。以基础培养基添加2.0%液体石蜡作为种子培养基；以基础培养基中添加0.5%大港油田原油作为降解培养基。以基础培养基添加30%原油，进行降黏度和降凝固点实验。

2.2.3　主要试剂

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒（Biospin），尿素、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、去离子甲酰胺、TEMED、lysozyme、Ampicillin均购自BBI，克隆载体pGMT-vector购于天根生物公司，T₄DNA Ligase、各种限制性内切酶、T4连接酶、PCR所用的高保真DNA聚合酶、Agarose Gel DNA purification Kit、DNA Marker DL15000、DNA Marker DL2000、dNTPs、X-gal、IPTG及蛋白酶K均购自TaKaRa公司，其余试剂均为国产分析纯。PCR引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成，序列测序由北京三博远志生物有限责任公司完成。试剂用水均为超纯水。

2.2.4　DGGE变性剂

（1）0%变性剂溶液

脱气10～15min，用0.45μm滤膜过滤灭菌。置于棕色瓶中于4℃保存一个月。

（2）100%变性剂溶液

（3）浓度低100%的变性剂溶液，参照上表添加丙烯酰胺，TAE和水，使用下表中的尿素和甲酰胺量。

2.2.5　仪器设备

高速冷冻离心机　　美国Beckman

高速冷冻离心机　　日本Hitachi

台式高速冷冻离心机Universal 32R　　德国Heritte

变形梯度凝胶电泳仪 Dcode^TM　　美国Bio-Rad

凝胶成像系统　　美国Bio-Rad

MyCycler梯度PCR仪　　美国Bio-Rad

全自动灭菌锅　　日本Hirata

光学显微镜　　日本Nikon

电感耦合等离子体发射光谱仪ICP-900（N+M）　　美国Thermo

旋转式黏度计　　上海峰志仪器有限公司

红外测油仪JDS-109C　　北京中仪远大科技有限公司