目前国内检测Mb的方法有RIA法、ELISA法、荧光免疫测定法等，RIA法灵敏度高，特异性强，但是操作过程繁琐，耗时长，且有放射性污染，所以现在较少应用。ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，但达不到急诊快速检测的要求。荧光免疫测定法是应用一对单克隆抗体的夹心法，该方法重复性好，线形范围宽，具有快速、敏感、准确的特点，临床上应用广泛。下面分别介绍各种检测方法及特点。

RIA是一门边缘学科，应用放射性核素标记示踪技术（即结合在抗原或抗体上）和医学免疫学抗原抗体反应（专一性结合反应）测定待测的靶物质，好比用无线电波示踪导弹行踪，并制导到靶目标上与之结合一样。核素标记和免疫学反应这两项技术的结合和发展，取得了分析方法上的重大突破，灵敏度高、特异性强，同时具有极其良好的微量分析效果，测定的稳定范围可以达到1×10 ^-9g～1×10 ^-12g水平（即1ng～1pg），使过去一下认为无法分析的极微量物质得以精确定量测定。该技术简便，重复性较好、准确性高，应用范围极广，已深入到临床各学科。它也作为最灵敏的血清Mb测定方法，利用Mb同I ¹²⁵标记Mb竞争有限的抗体，可以测定到10ng/mL～50ng/mL的水平。

ELISA是目前应用最广泛的一种免疫学检测方法，绝大部分心脏标志物都可应用该检测方法，包括检测肌红蛋白。其基本原理是先将已知的抗体结合在固相载体（酶标板）上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本盒酶标抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体发生反应。用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分，然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。

正常人血清中含有低浓度的Mb，但心肌出现损伤时后，大多数患者（如AMI）血清Mb含量会显著升高，因此检测Mb的方法要求有足够宽的检测范围及灵敏度。实验表明免疫磁珠酶联免疫定量检测法优于常规板式酶联免疫吸附试验。使用国产聚苯乙烯磁珠，经碳化二亚胺活化表面自由羧基，得以与抗Mb单抗耦联，用此抗体包被磁珠作为固相，另一Mb单抗标记辣根过氧化物酶，做双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人血清Mb，共检测临床血清标本50份，并与常规板式ELISA作对比。磁珠酶免疫定量检测方法用于人血清Mb定量检测范围可从常规板式ELISA的5μg/ L～200μg/L扩展到5μg/L～1000μg/L。

采用特异抗体结合于胶乳颗粒表面。标本与胶乳试剂在缓冲液中混合，标本中的肌红蛋白（Mb）与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在500nm～600nm附近测量溶液浊度的增强，其增强的程度与标本的Mb浓度相关。胶乳增强免疫比浊法，是新一代免疫测定技术。它大大提高了免疫比浊技术的敏感性、特异性，达到了ng/ml水平，具有测定快速、准确、重复性好、操作简便、试剂稳定、价格较低等优点。

采用基因工程技术和现代免疫学技术，克隆并纯化了肌红蛋白，然后制备了其单克隆与多克隆抗体，应用双抗体夹心一步法原理，以胶体金作为指示标记，交联抗肌红蛋白单克隆抗体，以相对应的多克隆抗体作为捕获抗体，与血液中的肌红蛋白结合并显色。

针对Mb不同表位的2株单克隆抗体，一株包被发光微粒，另一株进行生物素化，与包被有链霉亲和素的感光微粒共同构成检测性能，在化学发光仪中检测光信号，根据光信号的强度计算得出样品的Mb的浓度。

半定量MbGICA可用肉眼观察结果，是通过胶体金在T线和C线处聚集产生的颜色变化作为结果判断的依据，半定量方法赋予了C线更多的功能。我们根椐标本中Mb浓度高、T线捕获的免疫复合物量多，显色深，而随之迁移到C线处的金标记抗体减少，使C线显色变浅的规律，设计了C线与T线显色比值（C/T）这样一个参数，据此将检测结果分成3个区段：T线颜色较C线浅，表示Mb<70μg/L；T线颜色与C线颜色相接近，表示Mb浓度在70μg/L～150μg/L；T线颜色较C线深，表示Mb>150μg/L；若C线不显色，表示试条失效。其优点体现在测定同样浓度标本时，可以克服因不同测试条之间存在的变异因素而导致的显色差异。在临床应用中，可以通过配套定值质控品的方法，达到质量控制目的。总之，半定量Mb GICA的设计充分考虑到了生理和病理情况下Mb在人体内的分布情况，虽然还不是精确的定量结果，但对于Mb这样一种在正常人血清中也呈低浓度存在的物质，半定量检测方法既能做到即时检验，又能满足临床应用要求。

正常人血清参考范围2.0μg/L～68.9μg/L，Mb>75μg/L是急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）诊断的临界值。根据以往的研究结果，中国人群血清Mb95%含量范围分布在0μg/L～70μg/L，而AMI患者血清Mb浓度>80μg/L。