上QQ阅读APP看书,第一时间看更新
二、实验室检测及参考值
GPBB的实验室检测主要包括酶活性测定、免疫学测定以及最近提出的即时检验法(point-of-care testing,POCT)。酶活性测定包括血液、组织提取液中酶催化活性的测定以及组织化学定位。免疫学测定则主要包括血液标本中的质量测定和免疫组织化学检测等。GPBB活性检测方法是根据糖原(N+1)+葡萄糖-1-磷酸→糖原(N)+无机磷酸盐(Pi),通过测定酶反应生成液中无机磷含量来确定及酶活性的高低。正常人血清中检测不到这种酶活性的存在,而AMI患者血清中GPBB活性可以测到,但其灵敏度较低且只能检测总GP活性。除组织化学方法协助免疫组化进行组织定位外,应用价值较小。1993年Frederiks等用免疫组化方法测定GP活性。以GP活性作为小鼠心肌早期缺血性损伤的参数,以线粒体中出现絮状沉淀作为不可逆性损伤的标志。检测结果表明,心肌损伤的早期,GP活性增高。
(一)免疫组化法
Frederiks等用免疫组化法测定GPBB活性,作为小鼠心肌早期缺血性损伤的参数,以线粒体中出现絮状沉淀作为不可逆性损伤的标志。结果发现,心肌损伤早期GPBB活性增加;而GPBB活性下降与超微结构细胞的不可逆性损伤相关。用酶组织化学染色可显示GPBB的定位及分布,但只能检测总GP活性,无法定量,灵敏度较低,应用价值不大。
(二)GP活性检测法
Krause等根据糖原分解逆反应,糖原(N1)+葡萄糖-1-磷酸→糖原(N)+无机磷酸盐(Pi),通过测定酶反应生成液中无机磷含量来确定酶活性的高低。正常人血清中检测不到酶活性,急性心肌梗死患者4h的血清中GP活性1.5~18mU/ml。Company等采用连续光度法监测GP催化产物葡萄糖-1-磷酸的产生所致反应体系pH的降低,并用酚红指示该变化,采用停流分光光度法快速测定GP催化反应速率。Ameliushkina等用微柱层析技术分离GP,然后用糖原溶液洗脱,再用光度法于340nm检测洗脱液中葡萄糖-1-磷酸的量。Wollenberger等采用酶电极测定血清GPa和GPb活性,所用过氧化氢电极膜上含有碱性磷酸酶、变旋酶和葡萄糖氧化酶。本方法快速灵敏,线性为0.005~0.2U/ml。
(三)免疫酶法
Rabitzsch等应用免疫酶法对健康人、稳定型心绞痛、急性心肌梗死、非外伤性胸痛患者的外周血GPBB进行测定,以7μg/L作为正常人外周血GPBB的上限值。免疫酶法灵敏准确,测定范围在0.5~200μg/L之间,测定下限为0.3μg/L。GPBB与GPMM、GPLL的交叉反应性均小于1%,且结果不受年龄、性别及种族的影响。
(四)ELISA法
Fiebig等建立双抗体夹心ELISA法测定GP浓度,测定范围1~200μg/L,正常参考值上限7μg/L。双抗体夹心法特异性好,稳定性高。荣墨克系统研究了测定GPBB的ELISA双抗体夹心法,线性可达100μg/L。正常人参考值范围为1.05~6.5μg/L,急性心肌梗死诊断域值为7.9μg/L。
(五)免疫抑制法
Rabitzsch等用多克隆兔抗人糖原磷酸化酶同工酶选择性免疫抑制法检测GPBB活性,其测定范围1~125nkat/L,正常人范围是(3.07±1.64)nkat/L。
(六)POCT
POCT(point-of-care testing)法又称床边检测法,是在采样现场即刻进行分析,省去标本在实验室检验时的复杂处理程序,快速得到检验结果的一类新方法。具有快速、简单的特点。对于AMI患者的诊断,如果临床表现高度可疑心电图表现无决定性诊断意义,心肌损伤标志物cTnI床旁诊断试剂的应用可使此类急性患者的诊断和治疗方案的确定变得更容易和更准确,整个过程只需要15分钟。David Stejskal等人对20例非ST段抬高型心肌梗死患者和20例无急性冠脉综合征的患者同时采用POCT床边试剂盒和ELISA试剂盒检测GPBB血清表达水平,结果发现非ST段抬高心肌梗死患者血清中GPBB水平显著增高,胸痛6小时后,GPBB诊断非ST段抬高型心肌梗死的敏感度和灵敏度接近100%,其中,阳性值定为8.5 μg/L。而POCT组在非ST段抬高型心肌梗死的诊断上同ELISA法大致相同(χ 2= 36.1; p < 0.01)。由此可见GPBB的即时检测可以作为ACS最初4小时内诊断心肌梗死的重要方法。POCT的应用不仅可以改善实验结果而且可以降低资源的占用患者住院的时间,采样时间,医护人员的占用时间等。扩展了心肌梗死标志物检测的应用,前途十分光明。