13．什么是MCID品种鉴定技术及CID绘制过程？

人工绘制品种鉴定简图（Manual Cultivar Identification Diagram，MCID）是基于DNA标记快速鉴定品种的方法。该方法将经某一引物扩增、电泳后具有相同谱带的归纳为一组，具有唯一特异性谱带的被鉴别区分出来，并在品种鉴定简图（CID）上标记相应引物和谱带，充分、直观地反映出不同品种区分所用的引物及多态性带。

（1）MCID绘制过程（图1-4）

图1-4　3对引物鉴别区分5个酿酒葡萄品种的MCID法流程

针对葡萄的基因序列设计一组随机引物，再选择几个遗传差异较大的葡萄DNA样品对设计好的引物进行筛选，通过连续两次梯度PCR选择条带一致的温度作为退火温度。筛选出扩增DNA指纹条带清晰、稳定性和多态性好的引物。以5个品种为例介绍绘制过程。

① 首先根据引物VvMD27扩增的电泳图上大小为250bp、310bp和370bp的3条特征性条带的有无将5个品种分成2组，将有特征性谱带的用（＋）表示，没有特征性谱带的表示为（－）。第1组是250bp（－）、310bp（＋）和370bp（－），包括‘北植102’和‘列昂蜜乐’2个品种；第2组是250bp（－）、310bp（－）和370bp（－），包括‘烟73’、‘品丽珠’和‘郑果11号’3个品种。

② 然后继续利用VvMD28扩增的电泳图上大小为250bp和330bp的2条特征性条带的有无分别对第1组和第2组进行鉴定。第1组的‘北植102’具有330bp条带、缺失250bp条带，而‘列昂蜜乐’同时具有250bp和330bp两条谱带，从而将它们区分开来。第2组首先鉴定出表现为250bp（＋）、330bp（－）的‘郑果11号’；剩余2个品种‘烟73’和‘品丽珠’均表现为250bp（－）、330bp（－），需进一步鉴定。

③ 最后，利用VvMD32扩增的电泳图上大小为240bp和350bp的2条特征性条带的有无将表现为240bp（－）、350bp（＋）的‘烟73 ’和表现为240bp（＋）、350bp（－）的‘品丽珠’区分开来。

④ 对比谱带后获得的分组信息，人工绘制直观的品种鉴别图谱，在树形鉴别图上将每一次筛选用的引物以及多态性谱带大小逐一进行标记。

（2）品种鉴定图应用。若需要对CID图上的某些品种进行区分，可以很容易地找到所需的引物及需要参考的特征性谱带。利用这些引物进行PCR扩增，对PCR扩增的多态性条带进行分析观察，逐步将待鉴定品种区分出来。

例如：随机选择CID图上‘烟73’和‘郑果11号’两个品种进行验证，首先在CID图上找到两个品种最后分支所用的引物VvMD28以及扩增的多态性带（250bp），利用该引物进行PCR扩增，根据特异性条带的有无进行判断，若有则为‘郑果11号’，若缺失则为‘烟73’，从而快速区分两个品种。