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一、药敏试验概述
20世纪40~50年代结核病现代化疗取得了巨大的进展,但耐药问题也随之产生。20世纪60年代WHO制订了抗结核药物药敏试验的原则和方法,2011年更新版的《耐药结核病规划管理指南》建议开展异烟肼和利福平或利福平快速药敏试验。目前药敏试验有以下几种方法:
1.固体培养法
使用改良罗氏培养基或琼脂培养基,具体方法分为绝对浓度法和比例法。在我国广泛使用的是改良罗氏培养基的绝对浓度法和比例法。其优点是成本低廉、容易进行实验室质量控制,缺点是约需3个月才能出结果,且在药敏试验结果出来之前可能发生新的耐药,不能满足耐药结核病快速诊断的需求。
2.液体培养法(自动化的MGIT960)
WHO推荐结核分枝杆菌药敏试验使用MGIT960,原理为标本经前处理后接种到系统配套的液体培养基,该培养基中包被有对氧浓度敏感的荧光物质,当细菌生长代谢消耗培养基中的氧时,氧浓度降低,荧光被激发,系统可以连续检测荧光水平,自动报告结果。其优点是在2~3周内报告培养和DST结果,但存在高污染率的问题。
3.耐药基因快速检测法
WHO推荐用于耐药结核病快速检查的方法有线性探针检测和Xpert MTB/RIF两种技术。其优点是在1天内报告结果,而且与传统药敏试验有较高的一致性,不足之处是目前线性探针检测方法只能检测异烟肼和利福平耐药性,Xpert MTB/RIF仅能检测利福平耐药性。