四、BNIP3通过FAK信号通路促进低氧条件下表皮细胞迁移

既往研究证实，BNIP3广泛分布于皮肤的表皮层，对表皮细胞的稳态及分化发挥重要作用，但其对表皮细胞迁移的影响尚无研究报道。低氧可上调多种肿瘤细胞BNIP3，这与肿瘤细胞的侵袭转移密切相关。FAK是调控细胞骨架的重要分子，对细胞迁移有重要的调控作用。已知BNIP3在上皮源性肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用，而低氧条件下的表皮细胞中BNIP3的表达也明显上调。将体外培养的小鼠原代表皮细胞在活细胞工作站下连续动态观察并记录各组细胞的运动情况，结果提示：经低氧处理6小时，小鼠原代表皮细胞的运动范围增加，运动的轨迹速度也增加，而特异性干扰BNIP3组的表皮细胞运动范围和运动的轨迹速度均明显减小。细胞片层划痕模型同样证实，干扰BNIP3表达后低氧表皮细胞迁移率于划痕后12小时起便明显低于对照组。

另外，还发现低氧条件下小鼠原代表皮细胞中BNIP3的下调可明显降低p-FAK的表达水平，而FAK总蛋白无明显变化，说明BNIP3的下调抑制了低氧条件下FAK信号通路的活化。进一步使用TAE226（FAK的特异性抑制剂）处理后，低氧条件下表皮细胞p-FAK表达减少，p-FAK/FAK的比例下降，即TAE226对FAK活性的抑制效应是明显的；通过单个细胞运动性检测，我们发现抑制FAK活性后，表皮细胞的运动范围明显缩小，运动速度明显下降；通过片层细胞划痕实验模拟在体创面上皮化过程，结果表明，从划痕后12小时开始，创面愈合率显著降低，提示抑制FAK活性可显著抑制表皮细胞迁移速率。