任务一　光学显微镜的使用

一、任务分析

1．显微镜的成像原理

显微镜的基本放大原理如图2-18所示。其放大作用主要由焦距很短的物镜和焦距较长的目镜来完成。为了减少像差，显微镜的目镜和物镜都是由透镜组构成复杂的光学系统，其中物镜的构造尤为复杂。为了便于说明，图中的物镜和目镜都简化为单透镜。物体AB位于物镜的前焦点外但很靠近焦点的位置上，经过物镜形成一个倒立放大的实像A′B′，这个像位于目镜的物方焦距内但很靠近焦点的位置上，作为目镜的物体。目镜将物镜放大的实像再放大成虚像A″B″，位于观察者的明视距离（距人眼250mm）处，供眼睛观察，在视网膜上成最终的实像AB。

2．油镜工作原理

使用油镜时需在载玻片上滴加香柏油，其原因是：油镜的透镜很小，自标本片透过的光线，因载玻片和空气介质的密度不同（空气折射率n＝1）而使部分光线经过载玻片和空气折射后不能进入接物镜，致使射入光线较少，物像不清晰。在油镜与载玻片之间滴加与玻璃折射率（n＝1.52）相近的香柏油（n＝1.515），光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而较少发生折射，视野的光亮度增强，物像清晰（图2-19）。

被观察物体的放大倍数是目镜放大倍数和物镜放大倍数的乘积。

二、任务实施

1．明确目标

（1）学习并掌握显微镜油镜的原理和使用方法。

（2）学习并掌握用显微镜观察微生物代表性标本及正确绘图的方法。

（3）培养学生规范操作和合作意识。

2．任务准备

（1）器材　光学显微镜、酵母菌标本片、青霉标本片、黑曲霉标本片、黑根霉标本片、大肠埃希菌标本片、金黄色葡萄球菌标本片，擦镜纸。

（2）试剂　香柏油、二甲苯。

（3）文件　药品生产企业《普通光学显微镜操作规程》（表2-8）。

3．实施方案

（1）低倍镜观察

① 显微镜的安置　右手握镜臂，左手托镜座，保持镜身直立，使镜座距实验台边沿约为3～4cm。镜检者姿势要端正，使用显微镜时应双眼同时睁开观察，既可减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图记录。

② 打开光源　打开显微镜电源，转动物镜转换器，将低倍物镜旋转到工作位置，通过调节调光手轮调节光亮度。上升聚光器，将可变光阑完全打开。

③ 调节聚光器和物镜数值孔径相一致　双眼对着目镜根据瞳距调节双筒显微镜的目镜间距。根据视野的亮度和标本的明暗对比度来调节光圈大小，达到较好的效果。

④ 放置标本　下降镜台或上升镜筒，将标本片置于载物台上，用压片夹固定，移动纵向调节手轮和横向调节手轮，将要观察的部分对准通光孔。

⑤ 调焦　用目镜观察，旋转粗动手轮缓慢下降载物台或升起镜筒到看见模糊物像时，再转动微动手轮，调节到物像清晰为止。

⑥ 观察　用纵向调节手轮和横向调节手轮移动标本片，观察标本的各部位，找到适合的目的物像，仔细观察并记录观察结果。

（2）高倍镜观察

① 寻找视野　将在低倍物镜下找到的合适观察目标移到视野中心。

② 转换高倍镜　侧面注视，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至正下方。根据视野的亮度和标本的明暗对比度通过调节调光手轮调节光亮度和光阑调节手柄来调节光圈大小，达到较好的效果。

③ 调焦　使用齐焦物镜时，只要从低倍转到高倍再稍调一下微动手轮就可看清物像。若用不齐焦的物镜时，每转换一次物镜都要进行调焦，调焦时要从侧面观察，避免镜头与玻璃片相撞。然后从目镜观察，缓慢调节粗动手轮，使载物台上升（或镜筒下降），直至物像出现，再用微动手轮调至物像清晰为止。

④ 观察　找到需观察的部位，移至视野中央进行观察并记录结果。

（3）油镜观察

① 找合适的视野　先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观察的部位移到视野中央。

② 转换油镜　将油镜转到工作位置。

③ 调节聚光器与油镜数值孔径一致　将聚光器上升到最高位置，可变光阑开到最大。

④ 加香柏油　先用粗动手轮将载物台下降（或镜筒提升）约2cm，并将油镜转出。在标本片的镜检部位滴上一滴香柏油，然后将油镜转到工作位置。从侧面注视，用粗动手轮将载物台缓缓地上升（或镜筒下降），使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本片接触。

⑤ 调焦　双眼从目镜观察，同时缓慢转动粗动手轮使载物台徐徐下降（或镜筒上升），至出现模糊的物像时再用微动手轮调节，至物像最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物像，必须再从侧面观察，重复上述操作。

⑥ 观察　观察并记录结果。

（4）光学显微镜使用后的处理

① 关闭显微镜　关闭显微镜电源开关，下降载物台或上升镜筒，取下玻璃片。

② 清洁显微镜　清洁油镜，先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用蘸少许二甲苯的擦镜纸擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸抹去残留的二甲苯。清洁目镜和其他物镜，用干净的擦镜纸擦净。用软的绸布擦净机械部分的灰尘。

③ 还原　将物镜转至“八”字式，下降载物台，使载物台下降至最低位置，或缓慢下降镜筒，使物镜靠置在镜台上。将聚光器降至最低位置。

④ 除去涂片上的香柏油　用蘸少许二甲苯的擦镜纸擦去香柏油，再用干净的擦镜纸在涂片上擦拭干净。

4．结果分析

将观察到的微生物形态绘画于表2-9中。

三、任务评价

对照标准（表2-10）自我评价，小组评价，检查任务完成情况。

四、注意事项

（1）显微镜是精密仪器，操作时要小心，尽可能避免物理振动。

（2）避免将显微镜放置在有阳光直射、高温或高湿、多尘以及容易受到强烈振动的地方，确保工作表面平坦并水平。

（3）当移动显微镜时，双手分别、始终要抓住显微镜后盖扣手处和镜体前端，小心轻放。

（4）工作时，集光镜表面会变得非常热，应确保集光镜周围有足够的散热空间。

（5）光学显微镜的维护和保养

① 使用纱布轻轻擦拭清洁透镜。如果要除去指纹和油渍，用极少量的乙醚（70%）和酒精（30%）的混合液或二甲苯沾湿纱布轻轻拭去。

② 不要使用有机溶剂擦拭显微镜的非光学件，如要清洁，请使用中性去污剂。

③ 使用时，如果显微镜被黏液沾湿，应立即切断电源，并擦干。

④ 不要随便拆开显微镜的部件。这样会影响显微镜的功能，甚至损坏显微镜。

⑤ 不使用显微镜时，应用防尘罩盖上。